У нас уже 242733 рефератов, курсовых и дипломных работ
Заказать диплом, курсовую, диссертацию


Быстрый переход к готовым работам

Мнение посетителей:

Понравилось
Не понравилось





Книга жалоб
и предложений

 





Название Влияние обработки парахлормеркурийбензоатом натрия на проявление антигемолитической активности хлорпромазина при гипотоническом гемолизе эритроцитов человека
Количество страниц 64
ВУЗ Биологический факультет Кафедра физиологии человека и животных
Год сдачи 2006
Содержание СОДЕРЖАНИЕ
РЕФЕРАТ………………………………………………………………………..3
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ…………………………………………………….5
ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………………...6
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………………….9
1.1. Эритроциты человека. Структура мембран эритроцитов…………………………………………………..……..………9
1.2. Осмотическая и температурная чувствительность эритроцитарных мембран………………………………………………………………….14
1.3. Влияние хлорпромазина и ПХМБ на эритроцитарные мембраны человека…………………………………………………………..18
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ……………………..24
Глава 3 СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ…………….27
Summary………………………………………………………………….58
ВЫВОДЫ……………………………………………………………...……….57
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ ………………………….............59






РЕФЕРАТ

Дипломная работа состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы, собственные результаты и их обсуждение, выводы, список литературы, который включает 35 работ зарубежных и 16 отечественных авторов.
Работа изложена на 64 страницах машинописного текста, содержит 3 таблицы и 12 рисунков.
Ключевые слова: эритроциты, гипотонический гемолиз, хлорпромазин, парахлормеркурийбензоат, антигемолитическая активность.
Цель данной работы – исследовать влияние хлорпромазина на гипотонический лизис эритроцитов человека в средах различного катионного состава (К+, Na+ и Li+) и при обработке клеток парахлормеркурийбензоатом натрия, ингибитором водного транспорта.
Объектом исследования служили эритроциты человека.
В работе было проведено сравнительное исследование гипотонического гемолиза эритроцитов в средах различного состава, при различной температуре и продолжительности инкубации. А также определялись показатели антигемолитической активности хлорпромазина в различных средах в присутствие парахлормеркурийбензоата натрия и без него.
Установлено, что наиболее устойчивыми к действию гипотонического стресса 37°С и 0°С являются эритроциты находящиеся в средах, содержащих NaCl или KCl, минимальной устойчивостью обладают эритроциты перенесённые в Li+-содержащие среды. При 0°С чувствительность эритроцитов во всех солевых средах сдвигается в область больших концентраций, т.е. чувствительность клеток к гипотонической среде повышается. Хлорпромазин проявляет защитный эффект в условиях гипотонического стресса эритроцитов человека, однако проявление антигемолитической активности хлорпромазина зависит от катионного состава гипотонической среды. Хлорпромазин проявляет более высокую эффективность в средах, содержащих NaCl или KCl, по сравнению с LiCl-содержащей средой. При обработке клеток парахлормеркурийбензоатом натрия уровень антигемолитической активности хлорпромазина снижается. Особенно этот эффект, вызванный парахлормеркурийбензоатом натрия, проявляется в среде содержащей LiCl.
При увеличении продолжительности предварительной инкубации клеток наблюдается снижение антигемолитической активности хлорпромазина при гипотоническом гемолизе эритроцитов человека и отсутствие защитного эффекта амфифильного вещества в Li+-содержащей среде.




СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ПХМБ – парахлормеркурийбензоат натрия
ХПР – хлорпромазин гидрохлорид
АГ-активность – антигемолитическая активность
ПАВ – поверхностно активные вещества
СМ – сфингомиелин
ФХ – фосфатидилхолин
ФЭ– фосфагидилэтаноламин
ФС – фосфатидилсерин
ФИ – фосфатидилинозитол
ФК – фосфатидная кислота































ВЕДЕНИЕ

В настоящее время одной из актуальных проблем биологии является исследование механизмов повреждения и защиты клеток в условиях действия стрессовых факторов. К настоящему времени большинство биологов сходится во мнении, что мембранные системы клеток обладают наиболее высокой чувствительностью к действию физико-химических факторов среды. Особое значение имеет реакция плазматической мембраны, т.к. именно плазматическая мембрана первой воспринимает изменения, происходящие во внешней среде: рН, температура, осмотическое давление и др. При изменении осмотического давления (как при понижении, так и при повышении) может наблюдаться гемолиз эритроцитов в результате дестабилизации биологической мембраны. Амфифильные вещества обладают защитным эффектом при осмотических стрессах эритроцитов: гипотоническом [1, 2, 3] и гипертоническом [4, 5], а также при постгипертоническом криогемолизе [6] и лизисе клеток, вызванном действием порообразующих агентов [1, 4].
Гипотонический гемолиз является постоянным объектом фундаментальных и прикладных исследований, поскольку находит широкое практическое применение: как тест на сохранность барьерной функции эритроцитарной мембраны после действия на кровь стрессовых факторов, для изучения мембранного транспорта, как диагностический тест на функциональные нарушения системы крови и другие патологические изменения в организме [7].
Гипотонический лизис представляет собой явление разрушения клеток при помещении их в среды с пониженной осмолярностью. На начальном этапе происходит набухание эритроцитов в результате избыточного поступления воды в клетки. Во время набухания клетки мембрана растягивается, что обуславливает рост мембранного натяжения. При определенном пороговом уровне натяжения в мембране образуются дефекты или поры, через которые выходят молекулы гемоглобина и низкомолекулярных веществ.
Существует несколько предположений относительно протектирующего действия амфифильных веществ в условиях гипотонического стресса. Считают [3], что амфифилы, встраиваясь в мембраны эритроцитов, инициируют выход ионов К+ из клетки, при этом снижаются различия в осмотических давлениях между внутриклеточной средой и гипотоническим раствором. Другие авторы [8] предполагают, что амфифилы, встроенные в мембрану, увеличивают ее поверхность, чем сдвигают значение критического гемолитического объема в сторону больших значений.
Набухание эритроцитов в гипотонической среде, в значительной степени, контролируется транспортом воды через водные каналы (аквапорины). Исходя из того, что максимальный защитный эффект амфифильного соединения хлорпромазина проявляется при одновременном действии вещества и стрессового фактора (в случае гипотонического гемолиза – гипотонической среды, в случае гипертонического стресса - гипертонического раствора) представляло интерес изучить влияние обработки эритроцитов ПХМБ, приводящей к ингибированию осмотического транспорта воды, на проявление антигемолитической активности ХПР в гипотонических средах различного состава (NaCl, KCl и LiCl).
Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:
1. изучить влияние различных солей (NaCl, KCl и LiCl) в диапазоне концентраций 0,04 – 0,1 М и температурных режимов 37 и 0 С на развитие гемолиза эритроцитов человека.
2. исследовать влияния различных солей на проявление антигемолитической активности хлорпромазина (80 мкМ) при гипотоническом гемолизе эритроцитов человека
3. исследовать влияния различных солей и модификации клеток ПХМБ на проявление антигемолитической активности хлорпромазина (80 мкМ) при гипотоническом гемолизе эритроцитов человека.

Список литературы ВЫВОДЫ

1. Гипотонический гемолиз эритроцитов человека зависит от катионного состава и температуры среды. В Li-содержащих средах гемолитическое повреждение клеток более выражено по сравнению с Na+- и K+-содержащими средами как при 37, так и при 0 С. Однако, при низкой температуре гемолиз начинает развиваться при больших значениях осмолярности среды
2. Проявление антигемолитической активности хлорпромазина зависит от катионного состава гипотонической среды. Хлорпромазин ( ) проявляет более высокую эффективность в средах, содержащих NaCl или KCl ( ), по сравнению с LiCl-содержащей средой. ( ).
3. Обработка эритроцитов ПХМБ снижает уровень антигемолитической активности хлорпромазина при гипотоническом гемолизе эритроцитов, причем степень снижения эффективности амфифильного соединения зависит от катионного состава гипотонической среды. Так, наиболее выражен указанный эффект в Li+- содержащей среде по сравнению со средами, содержащими Na+или K+.
4. При увеличении продолжительности обработки клеток ПХМБ (до 40 мин) наблюдается снижение АГ активности ХПР при гипотоническом гемолизе эритроцитов в Na+ и K+-содержащих средах и отсутствие защитного эффекта амфифильного вещества в Li++-содержащей среде.







Summary
The purpose of this work is to investigate chlorpromazine influence on hypotonic lyses of human erythrocytes in mediums of different cationic compositions (K+, Na+ and Li+) and in case of exposing cell to action of sodium parachloridiummercurybenzoate, water transport inhibitor.
The objects of investigation were human erythrocytes.
In this work there was carried out a comparing research of hypotonic erythrocyte haemolysis in mediums of different compositions, with different temperatures and incubation duration. Also there were defined antihaemolytic activity indexes of chlorpromazine in different mediums in fresence of sodium parachloridiummercurybenzoat and without it.
It was estimated, that maximum stability in hypotonic stress between 37ºC and 0ºC is a feature of erythrocytes in mediums containing NaCl and KCl, and minimum stability have erythrocytes, which were moved to Li+-containing mediums. Jf 0 C, erythrocyte sensibility moves to big concentrations, so all sensibility in hypotonic mediums increases. Chlorpromazine shows a protective affect in human erythrocyte hypotonic stress, but exhibition of chlorpromazine antihaemolytic activity depends on cationic composition of hypotonic medium. Chlorpromazine acts more effective in mediums containing NaCl and KCl compared with LiCl-containing medium. In sodium parachloridiummercurybensoate all exposure chlorpromazine antihaemolytic activity level decreases. Especially this effect, induced by sodium parachloridiummercurybensoate, is shown in LiCl-containing medium. If duration of preliminary incubation increases, there appears a chlorpromazine antihaemolytic activity decrease in hypotonic haemolysis of human erythrocytes and absence of amphifil compound protective effect in Li+-containing medium.






СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Орлова Н.В. влияние амфифильных соединений на осмотическую и температурную устойчивость эритроцитов: Дисс. … канд. биол. наук.- Харьков, 2001.- 126 с.
2. Hagerstrand H., Isomaa B. Lipid and protein composition of exovesicles released from human erythrocytes following treatment with amphiphiles// Biochim. Biophys. Acta.- 1994.- 1190 .- P. 409-415.
3. Isomaa B., Hagerstrand H., Paatero G., Engblom A.C. Permeability alterations and antihaemolysis induced by amphiphiles in human erythrocytes// Biochim. Biophys. Acta.- 1986.- 860.- P. 510-524.
4. Шпакова Н.М. Действие криопротекторов и амфипатических соединений на состояние эритроцитов, подвергнутых холодовому и осмотическому шоку: Дисс. ...канд. биол. наук.- Харьков, 1988.- 191 с.
5. Betticher DC, Geiser J Resistance of mammalian red blood cells of different size to hypertonic milieu. Comp Biochem Physiol A. 1989;93(2):429-32.
6. Нипот О.Е. Вивчення механiзмiв пошкодження еритроцитiв при дегiдратацii-регiдратацii i дii деяких лiтичних пептидiв: Автореф.дис. ...канд. биол. наук.- Харкiв, 1997.-24 с.
7. Панина Ю.Е. Физико-математическая теория гипотонического гемолиза эритроцитов человека: Дисс. канд. физ-мат.наук.- Харьков, 1998.- 129 с.
8. Seeman P. The membrane actions of anesthetics and tranquilizers // Pharmacol. Rev.-1972.- 24.- P. 583-655.
9. Черницкий Е.А., Воробей А.Б. Структура и функция эритроцитарных мембран.- Минск: Наука и техника, 1981.- с. 3, 14-18.
10. Ноздрачев А.Д., Баженов Ю.И., Баранникова И.А. и др. Начала физиологии: Учебник для вузов. 2-е изд., испр. / Под ред. акад. А.Д. Ноздрачева. – СПб.: Издательство «Лань», 2002 – с.586 – 609.
11. Engen RL, Clark CL. High-performance liquid chromatography determination of erythrocyte membrane phospholipid composition in several animal species. // Am J Vet Res. 1990 Apr; 51 (4): 577- Engen RL, Clark CL. High-performance liquid chromatography determination of erythrocyte membrane phospholipid composition in several animal species. // Am J Vet Res. 1990 Apr; 51 (4): 577-80.
12. Белоус А.М., Грищенко В.И. Криобиология. – Киев: Наукова думка, 1994 – с.205.
13. Белоус A.M., Бондаренко В.А., Бабийчук Л.А. и др. Единый механизм повреждения клетки при термальном шоке, замораживании и постгипертоническом лизисе// Криобиология, 1985. - №2. – С. 25-30.
14. Денисова О.Н., Рамазанов В.В., Жегунов Г.Ф. Чувствительность эритроцитов различных животных к гипертоническому криогемолизу //Пробл. Криобиологии. – 2004. - №1. – с. 12-15.
15. Rodgers W. and Glaser M. Characterization of lipid domains in erythrocyte membranes. Proc Natl Acad Sci USA. 1991 February 15; 88(4): 1364–1368.
16. Haest C. Interactions between membrane skeleton proteins and the intrinsic domain of the erythrocyte membrane. // Biochimica et Biophysica Acta.- 1982.- 694.- P.331-352.
17. Gov N., Zilman A.G., Safran S. Cytoskeleton confinement and tension of red blood cell membranes // Phys. Rev. Lett.- 2003.- 90.- Р. 228101
18. Mohandas N., Chasis J. A., Shohet S. B. The influence of membrane skeleton on red cell deformability, membrane material properties, and shape // Semin. Hematol.- 1983.- 20, № 3.- Р. 225-242.
19. Shohet S. B. Possible roles for the membrane cytoskeleton in regulating red cell stability and deformability // Scand. J. Clin. Lab. Invest. Suppl.- 1981.- 156.- Р. 123-130.
20. Sheetz M.P., Painter R.G., Singer S.J. Relationships of the spectrin complex of human erythrocyte membranes to the actomyosins of muscle cells // Biochemistry. 1976 Oct 5; 15(20):4486-92.
21. Mosior M., Bobrowska M., Gomulkiewicz J. Effect of the level of ATP and of the state of spectrin on osmotic properties of bovine erythrocytes. - Biochim Biophys Acta. 1990 Mar; 1022(3):355-60.
22. Utoh J., Zajkovski-Brown J.E., Harasaki H. Effects of heat on fragility and morphology of human and calf erythrocytes. – J Invest Surg. 1992 Oct-Dec; 5(4):305-13.
23. Oyewale J.O. Changes in osmotic resistance of erythrocytes of cattle, pigs, rats and rabbits during variation in temperature and pH. Zentralbl Veterinarmed A. 1992 Mar; 39(2):98-104.
24. Salvioli G., Gaetti E., Panini R., Lugli R., Pradelli J. Different resistance of mammalian red blood cells to hemolysis by bile salts Lipids 1993 Nov;8(11):999-1003.
25. Williamson P. et al. Ca-induced transbilayer redistribution of all major phospholipids in human erythrocytes. // Biochemistry.-1992.-31, №27.-P.6355-6360.
26. Strange K. Cellular volume homeostasis. Adv Physiol Educ 28:155-159, 2004.
27. Мембраны: ионные каналы. Сборник статей / Под ред. Чизмаджева Ю. А. – М: Издательство Мир, 1981. – с. 28-30.
28. Pribush A., Meyerstein D., Meyerstein N. Kineties of erythrocyte swellingband membrane hole formation in hipotonik media// Biochim Biophys Acta.- 2002.-1558.-P. 119-132.
29. Parker J.C. In defense of cell volume? Am J Physiol. 1993 Nov; 265(5 Pt 1):C1191-200.
30. Lieber M.R., Steck T.L. Dynamics of the holes in human erythrocyte membrane ghosts. //J Biol. Chemistry. – 1982.- Oct;257, №19.- P.11660-11666.
31. Sato Y., Yamakose H., Suzuki Y. Mechanism of hypotonic hemolysis of human erythrocytes //Biol Pharm Bull 1993, 16(5) 506-512. 16(2).-P. 188-194.
32. Yamaguchi T., Watanabe S., Kimoto E. ESR spectral changes induced by chlorpromazine in spin-labeled erythrocyte ghost membranes. – Biochim Biophys Acta. 1985 Nov 7;820(2):157-64.
33. Евстратова К.И., Купина Н.А., Малахова Е.Е. Физическая и коллоидная химия. – М.: Высш. шк., 1990. – 487 с.:ил.
34. Ершов С.С., Орлова Н.В., Шпакова Н.М. Чувствительность эритроцитов млекопитающих к изменению температурных и осмотических условий среды //Пробл. Криобиологии. – 2004. - №3. – с. 51-57.
35. Cullis P.R. Lipid polymorphism and the functional roles of lipids in biological membranes. Biochim Biophys Acta. 559: 399-420. 1979.
36. Кулешова Л.Г., Орлова Н.В., Шпакова Н.М. Антигемолитическая и трансформирующая активность амфифильных соединений //Пробл. Криобиологии. – 2001. - №1. – с. 915.
37. Jacob H. S., Jandl I.H. Effekts of sulfhydryl inhibition on red blood cells. 1.Mechanism of hemolysis// J. Clin. Invest. – 1962-41, №4. – P.779-792.
38. Kunimoto M., Shibata K., Miura T. p-Chlormercuribenzoate-induced dissociation of cytoskeletal proteins in red blood cell of rats // Biochim. Biophys. Acta.- 1987.- 905, № 2.- P. 257-267.
39. Clark S.J., Ralston G.B. The dissociation of peripheral proteins from erythrocyte membranes brought about by p-mercuribenzenesulfonate // Biochim. Biophys. Acta.- 1990.- 1021, № 2.-Р.141-147.
40. Бондаренко Т.П., Кирошка В.В. Модифицирующее действие низкомолекулярных компонентов среды на устойчивость эритроцитов в средах, содержащих непроникающий криопротектор // Физико-химические свойства и биологическое действие криопротектора.- Харьков.- 1990.- С.16-20.
41. Benga G., Popescu O., Borza V., Pop V.I., Hodarnau A. Water exchange through erythrocyte membranes: biochemical and nuclear magnetic resonance studies re-evaluating the effects of sulfhydryl reagents and of proteolytic enzymes on human membranes // J. Membr. Biol. –1989.- 108, № 2.- Р.105-113.
42. Benz R., Tosteson M.T., Schubert D. Formation and properties of tetramers of band 3 protein from human erythrocyte membranes in planar lipid bilayers // Biochim. Biophys. Acta.- 1984.- 775, № 3.- Р.347-355.
43. Zhang Z.H., Solomon A.K. Effect of PCMBS on anion transport in human red cell membranes // BBA.- 1992.- 1106(1).- P. 31-39.
44. Торчинский Ю.М. Сера в белках. – М: «Наука»., 1977-с. 43-46.
45. Bielawski J. Two types of haemolytic activity of detergents. - Biochim Biophys Acta. 1990 Aug 17;1035(2):214-7.
46. Толбатов Ю.А. Математическая статистика та задачі оптимізацііфії в алгоритмах і програмах: Навч. Посібник. – К. : Вища шк.., 1994. – с. 88-208.
47. Philip A. Knauf. Chemical modification of membranes. //J. general physiology – №58, 1971. P. 211-223.
48. Kim H., Tanaka S., Une S., Nakaichi M., Sumida S., Taura Y. A comparative study of the effects of glycerol and hydroxyethyl starch in canine red blood cell cryopreservation //J Vet Med Sci. – 2004. – 66, №12.- P.1543-1547.
49. Mela M, Eskelinen S. Hypotonic hemolysis of human erythrocytes // Biochim. Biophys. Acta.- 1984, 122 (4), P.515-525.
50. Cullis P.R. Lipid polymorphism and the functional roles of lipids in biological membranes.// Biochim Biophys Acta- 1979 P.559: 399-420.
51. Manabu K., Keiko S. and Takashi M. p-Chlormerkuribenzoate-induced dissociation of cytoskeletai proteins in red blood cells of rats // Biochim Biophys Acta 905(1987) P. 257-267.
Стоимость доставки работы, в гривнах:

(при оплате в другой валюте, пересчет по курсу центрального банка на день оплаты)		 300





Найти готовую работу


ЗАКАЗАТЬ

Обратная связь:


Связаться

Доставка любой диссертации из России и Украины

Вход для партнеров

Регистрация

Восстановить доступ

Материал для курсовых и дипломных работ


Ссылки:

Выполнение и продажа диссертаций, бесплатный каталог статей и авторефератов

Счетчики:

Besucherzahler
счетчик посещений

© 2006-2022. Все права защищены.
Выполнение уникальных качественных работ - от эссе и реферата до диссертации. Заказ готовых, сдававшихся ранее работ.