У нас уже 242733 рефератов, курсовых и дипломных работ
Заказать диплом, курсовую, диссертацию


Быстрый переход к готовым работам

Мнение посетителей:

Понравилось
Не понравилось





Книга жалоб
и предложений

 





Название СНИЖЕНИЕ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ МЕМБРАНОТРОПНЫХ КРИОПРОТЕКТОРОВ ДО ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ ИНДЮКА В ПРИСУТСТВИИ БЕЛКОВЫХ ДОБАВОК
Количество страниц 52
ВУЗ Харьковский национальный университет имени В.Н.Каразина
Год сдачи 2012
Содержание Аннотация
Петрик М.А.
Снижение цитотоксичности мембранотропных криопротекторов до замораживания спермы индюка в присутствие белковых добавок.
Дипломная работа: 50 стр., 17рис., 1 табл., 50 источников.
Объект исследования: влияние белковых добавок на сохранность спермиев индюка на этапе подготовки к замораживанию.
Цель работы: изучение механизмов снижения цитотоксичности мембранотропных криопротекторов на этапе подготовки к замораживанию спермы индюка в присутствии белковых добавок.
Методы исследования: для оценки сохранности спермиев на этапе подготовки к криоконсервированию определяли подвижность, переживаемость на микроскопе. Количество морфологически поврежденных спермиев определяли на конфокальном микроскопе. Оптическую плотность растворов измеряли на спектрофотометре.
Результаты исследования: установлено, что переживаемость сперматозоидов индюка в средах, содержащих 0,5% яичного альбумина, достоверно выше по сравнению со средами с одним криопротектором, а количество морфологически аномальных сперматозоидов значительно ниже.
В образовании комплекса белка с ДМФА, ДМАЦ и 2,3-БД, играют роль преимущественно неспецифические гидрофобные взаимодействия
Полученные результаты могут быть использованы для криоконсервирования спермы птиц, с целью сохранения редких пород.
Ключевые слова: криопротекторы, сперма индюка, яичный альбумин.





Содержание


Список условных сокращений…………………………………………………….
ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………………....
Раздел 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Криоконсервирование спермы птиц
1.2. Концепции механизма цитотоксичности криопротекторов
Раздел 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Получение спермы петухов и индюков
2.2. Оценка качества спермы и индюков
2.3. Исследование цитотоксичности криопротекторов до
замораживания
2.4. Изучение взаимодействия КП с альбуминов в присутствии БТС
2.5 Статистическая обработка результатов
Раздел 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Зависимость переживаемости спермиев индюка от состава
криозащитной среды при хранении in vitro.
3.2. Влияние яичного альбумина на морфологическую сохранность
спермиев индюка до замораживания.
3.3. Морфологические изменения сперматозоидов при добавлении
КП.
3.4. Механизм взаимодействие КП с альбумином в присутствии
бромтимолового синего.

ВЫВОДЫ…………………………………………………………………………….

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ………………………………...
Список литературы ВЫВОДЫ

1. Установлено, что переживаемость сперматозоидов индюка в средах, содержащих 0,5% яичного альбумина, достоверно выше по сравнению со средами с одним криопротектором.

2. Введение яичного альбумина в криозащитную среду значительно снижает цитотоксическое действие криопотектора на клетки, уменьшается количество морфологически аномальных сперматозоидов и количество клеток с поврежденной мембраной.

3. В образовании комплекса белка с ДМФА, ДМАЦ и 2,3-БД, обладающими выраженными мембранотропными свойствами, играют роль как специфические (Н-связь), так и неспецифические гидрофобные взаимодействия с преимущественным вкладом последних.


Список литературы
1. Bakst M.R Effect of bovine serum albumin on motility and fecundity of turkey spermatozoa before and after storage / M.R. Bakst, H.C. Cecil //J.Reprod.Fert.- 1992. – v.94.- P. 287-293.
2. Линник Т.П. Влияние белковых добавок к криозащитной среде на сохранность спермиев петухов при криоконсервировании / Линник Т.П. [и др.] // Пробл. криобиологии.- 1996.- № 2.- С.35-39.
3. Бизикина О.В., Линник Т.П. Криоконсервирование спермы петухов. III.Цитотоксичность и криопротекторная активность смеси N,N- диметилформамида с диолами //Пробл. криобиологии.– 2002.– №1.– С. 39-44.
4. Линник Т.П., Мартынюк И.Н. Подходы к созданию криозащитных сред при криоконсервировании спермы птиц//Пробл. Криобиологии. – 2010. – №2. – С. 109-122
5. Борончук Г.В. Специфика изменений физиолого-биохимических реакций в процессе криоконсервации спермы различных видов животных и разработкаметодов повышения ее криорезистентности: Автореф. дис. д-ра биол. наук.– Кишинев, 1998.– 36 с
6. Броерский А.В. Криоконсервация спермы с/х птицы. (Обзор иностранной литературы) / / С. -х. биология.–1989.– №2.– С. 33–39.
7 . Курбатов А.Д., Платов Е.М., Корбан Н.В. Криоконсервация спермы с/х животных.– Л.: Агропромиздат, 1988.–256 с.
7. Ліннік Т.П. Фізико-хімічні фактори кріопошкоджень і кріозахисту сперматозоїдів півнів у циклі низькотемпера-турного консервування: Автореф. д и с. докт. біол. наук.– Харків, 2003.– 36 с.
8. Милованов В.К. Биология воспроизводства и искусственного осеменения животных.– М. : Сельхозиздат, 1962.– 696 с.
9. Наук В.А. Структура и функция спермиев с/х животных при криоконсервировании.– Кишинев: Штиинца, 1991.–199 с.
10. Наук В.А., Борончук Г.В., Ротт Н.Н. Длительное сохранение спермы сельскохозяйственных и диких животных // Консервация генетических ресурсов.– Пущино,1991.– С. 35–81.
11. Осташко Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей. – К и е в: Урожай. –1978.– 225 с.
12. Терещенко А.В. Сохранность сперматозоидов петухов в зависимости от условий криоконсервирования: Автореф. дис. .канд.биол.наук.– Харьков,1988.– 16 с.
13. Bellagamba F., Cerolini S., Cavalchini L.G. Cryopreservation of poultry semen: a review // World's Poultry Sc. J.– 1993.–Vol. 49, N2.– P. 157–166.
14. Lake P.E. The history and future of the cryopreservation of avian germ plasm // Poultry Sc.– 1986.– Vol. 65, N1.– P. 1–15.
15. Watson P.F. Recent developments and concepts in the cryopreservation of spermatozoa and the assessment of their post-thawing // Reprod. Fertil. Dev.– 1995.– Vol. 7, N2.–P. 871–891.
16. Leibo S.P., Bradley L. Comparative cryobiology of mammalian spermatozoa // The male gamete: from basic science to clinical applications / Ed. by C. Gagnon.– St. Louis: Cache River Press, 1999.– P. 502–516.
17. Watson P.F., Holt W.V. Cryobanking the genetic resource: Wildlife conservation for the future?.– London, New York, 2001.– 423 p.
18. Wishart G.J. The cryopreservation of germplasm in domestic and nondomestic birds // Cryobanking the genetic resource: Wildlife conservation for the future? / Ed. by P.F. Watson, W.V. Holt.– London, New York, 2001.– P. 181–200.
19. Линник Т.П., Грищенко В.И., Артеменко А.В., Терещенко А.В. Влияние осмотичности криозащитной среды на сохранность спермиев петухов при криоконсервировании // Проблемы криобиологии.– 2000.– №2.– С. 86–93.
20. Сахацкий Н.И., Терещенко А.В., Артеменко А.Б. и др. Разработка защитной среды для консервации спермы петухов // Научно-техн. бюл. УкрНИИП, Харьков.– 1988.–Вып. 24.– С. 29–32.
21. Sexton T. J. A new poultry semen extender. 1. Effect of extension on fertility of chicken semen // Poultry Sc.– 1977.–Vol. 56, N6.– P. 1443–1446.
22. Sexton T.J. A new poultry semen extender.5. Relationship of diluent components to cytotoxic effects of dimethylsulfoxide on turkey spermatozoa // Poultry Sc.– 1980.– Vol. 59, N5.–P. 1142–1144.
23. Sexton T. J., Fewlass T.A. A new poultry semen extender. 2. Effects of the diluent components on the fertilizing capacity of chicken semen stored at 5°C // Poultry Sc.– 1978.– Vol. 57, N1.– P. 277–284.
24. Sexton T. J., Jacobs L.A., McDaniel G.R. A new poultry semen extender. 4. Effects of antibacterial in the control of bacterial contamination in chicken semen // Poultry Sc.–1980.– Vol. 59, N1.– P. 274–281.
25. Watanabe M., Terada T. Fertility of frozen fowl semen stored for long term (9years) // Journal of the Faculty of Applied Biological Science Hiroshima University Fukuyama, Japan.–1980.– Vol. 19, N2.– P. 155–159.
26. Епифанова О.И., Терских В.В. , Полуновский В.А. Покоящиеся клетки. Свойства и функции в организме.–М.: Наука, 1983.– 176 с.
27. Мелехов Е.И. О возможном принципе регуляции повреждений и защитной реакции клетки // Журнал общей биологии.– 1983.– Т. ХLIV, №3.– С. 386–397.
28. Коваленко Г.В., Коваленко И.Ф., Линник Т.П. Проницаемость мембран эритроцитов крысы и кролика для криопротекторов ряда амидов и диолов // Пробл. криобиологии.– 2007.– Т. 17, №4.– С. 365–373.
29. Latif A., Ijaz A., Aleem M., Mahmud A. Effect of osmotic pressure and pH on the short-term storage and fertility of broiler breeder sperm // Pakistan Vet. J.– 2005.– Vol. 25, N4.–P. 179–182.
30. Линник Т.П. Амиды алифатических кислот – эффективные криопротекторы. II. Криозащитные свойства соединений ряда амидов // Пробл. криобиологии.– 1999.–№2.– С. 22–32.
31. Линник Т.П., Бизикина О.В. Криоконсервирование спермы петухов. II.Криозащитная активность диолов и амидов // Пробл. криобиологии.– 2001.– №4.– С. 43–51.
32. Шергин Н.П. Биохимия сперматозоидов сельскохозяйственных животных.– М.: Колос, 1967.– 232.
33. Fahy G.M. Cryoprotectant toxicity neutralizers reduce freezing injury // Cryo – Lett. – 1983. – Vol.4. – P. 309 –314.
34. Fahy G.M. Cryoprotectant toxicity : biochemical or osmotic ? // Cryo. – Lett. – 1984. – Vol.5, № 2. – P.79 – 90.
35. Fahy G.M. Cryoprotectant toxicity reduction: specific or non – specific ? // Cryo. – Lett. – 1984. – № 5. – P.287 – 289.
36. Fahy G.M. The relevance of cryoprotectant “toxicity”to cryobiology // Cryobiology. – 1986. – Vol.23, № 1. – P. 1 – 13.
37. Fahy G.M. Vitrification of multicellular systems and whole organs // Cryobiology. – 1987. – Vol.24, № 6 – P. 580 – 581.
38. Fahy G. M., Ali S. Cryopreservation of the mammalian kidney. II. Demonstration of immediate ex vivo function after introduction and removal of 7.5 M cryoprotectant // Cryobiology. – 1997. – Vol.35, № 1. – P. 114 – 131.
39. Fahy G.M., Macfarlane D.R., Angell C.A., Meryman H.T. Vitrification as an approach to cryopreservation // Cryobiology. – 1984. – Vol.21. – P.407 – 426.
40. Fahy G.M., Lilley T.H., Lindsell H., Douglas M.J, Meryman H.T. Cryoprotectant toxicity and cryoprotectant toxicity reduction: In search of molecular mechanisms // Cryobiology. – 1990. – Vol. 27, № 3. – P.247 – 268.
41. Parameters for evalution of viability assays: accuracy, precision, specficity, sensitivity, and standartization. Bank H.L., Schmehl M.K. Criobiology. – 1989. – 26, №3 – Сю203-211.
42. Gregory M.Fahy, Terence H. Lilley and other. Cryoprotectant Toxity and Cryoprotectant toxicity reduction: in search of molecukar mechanisms//Cryobiology 27, 247 – 268 (1990).
43. Fahy, G.M., Levy, D.I., and Ali, S.E. Some emerging principles underlying the physical properties, biological actions, and utility of vitrification solutions. Cryobiology 24, 196 – 213 (1987)
44. van der Elst, J., van der Abbeel, R.J., Wisse, E., and van Steirteghem, A. Effect of 1.2-propandiol and dimethylsulphoxide on the meiotic spindle of the mouse oocyte. Human Reprod.3, 960 – 967 (1988).
45. Fahy, G.M. Prevention of toxicity from high concentration of cryoprotective agents. In “Organ Preservation, Basic and Applied Aspects” (D.E. Pegg, I.A. Jacobsen, and N.A. Halasz, Eds.), pp. 367-369. MTP Press, Lancaster (1982).
46. Arnaud, F.G., and Pegg, D.E. Cryoprotection of human platelets with high concentrations of propylene glycol and glycerol. Cryobiology 25, 523-524 (1988).
47. Ahkong, Q.F., Fisher, D., Tampion, W., and Lucy,J.A. Mechanisms of cell fusion. Nature (London) 253, 194-195 (1975).
48. Brandts, P.M., Middelkoop, C.M., Gelsema, W.J., and DeLigny, C.L. Hydrophobic interaction chromatography of simple compounds on alkyl-agarose with different alkyl chain lengths and chain densities. Mechanism and thermodynamics. J. Chromatogr. 356,247-259 (1986).
49. Timasheff, S.N., and Arakawa, T. Stabilization of protein structure by solvents. In press (1989).
50. Carpenter, J.F., and Crowe, J.H. The mechanism of cryoprotection of proteins by solutes. Cryobiology 25, 244-255 (1988).
51. Arakawa T., and Timasheff, S.N. Protein stabilization and destabilization by guanidinium salts. Biochemistry 23, 5924-5929 (1984).
52. Brandts, J.F., and Hunt, L. The thermodynamics of protein denaturation. III. The denaturation of ribonuclease in water and in aqueous urea and ethanol mixtures. J. Amer. Chem. Soc. 89, 4826-4838 (1967).
53. Hickey, D.R., and Turner, D.H. Solvent effects on the stability of A7U7p. Biochemistry 24, 2086-2094 (1985).
54.Pfeil, W., and Privalov, P.L. Thermodynamic investigations of proteins. V. Calorimetric study of lysozyme denaturation by guanidine hydrochloride. Biophys. Chem. 4, 33-40 (1976).
55. Arakawa, T. Calculations of the partial specific volumes of proteins in concentrated salt, sugar and amino acid solution. J. Biochem. 100, 1471-1475 (1986).
56. Gekko, K., and Timasheff, S.N. Mechanism of stabilization by glycerol: Preferential hydration of glycerol – water mixtures. Biochem. 20, 4667-4676 (1981).
57. Arakawa, T., and Timasheff, S.N. The mechanism of action of Na glutamate, lysine HCl, and piperazine-N,N`-bis (2-ethanesulfonic acid) in the stabilization of tubulin and microtubule formation. J. Biol. Chem. 259, 4979-4986 (1984).
58. Lee, J.C., and Lee, L.L.Y. Preferential solvent interactions between proteins and polyethylene glycols. J. Biol. Chem. 256, 625-631 (1981).
59. Fujita, Y., and Noda, Y. The effect of ethylene glycol on the thermal denaturation of ribonuclease A and chymotrypsinogen A as measured by differential scanning calorimetry. Bull. Chem. Soc. Japan 57, 2177-2183 (1984).
60. Hamaguchi, K. Structure of muramidase (lysozyme). VIII. Effect of dimethyl sulfoxide on the stability of muramidase. J. Biochem. 56, 441-449 (1964).
61. Timasheff, S.N., and Inoue, H. Preferential binding of solvent components to proteins in mixed water-organic solvent systems. Biochemistry 7, 2501-2513 (1968).
62.Schachman, H.K., and Lauffer, M.A. The hydration, size and shape of tobacco mosaic virus. J. Amer. Chem. Soc. 71, 536-541 (1949).
63. Kauzmann, W. Some factors in the interpretations of protein denaturation. Adv. Protein Chem. 14, 1-63 (1959).
64. Tanford, C. “The Hydrophobic Effect.” Wiley-Interscience, New York, 1980.
65. Gerlsma, S.Y. The effects of polyhydric and monohydric alcohols on the heat induced reversible denaturation of chymotrypsinogen A. Eur. J. Biochem. 14, 150-153 (1970).
66. Arakawa T., and Timasheff, S.N. Stabilization of protein structure by sugars. Biochemistry 21, 6536-6544 (1982).
67. Schrier, E.E., and Schrier, E.B. The salting-out behavior and its relation to the denaturation of proteins by salts. J. Phys. Chem.71, 1851-1860 (1967).
68. Fink, A. L. Effects of cryoprotectants on enzyme structures. Cryobiology 23, 28-37 (1986).
69. Inoue, H., and Timasheff, S.N. The interaction of α-lactoglobulin with solvent components in mixed water-organic solvent systems. J.Amer. Chem. Soc. 90, 1890-1897 (1968).
70. Baxter, S.J., and Lathe, G.H. Biochemical effects on kidney of exposure to high concetretions of dimethyl sulfoxide. Biochem. Pharmacol. 20, 1079-1091 (1971).
71. Bowlus, R.D., and Somero, G.N. Solute compatibility with enzyme function and structure: Rationales for the selection of osmotic agents and endproducts of anaerobic metabolism in marine invertebrates. J. Exp. Zool. 208. 137-152 (1979).
72. Hand, S.C., and Somero, G.N. Urea and methylamine effects on rabbit muscle phosphofructokinase. Catalytic stability and aggregation state as a function of pH and temperature. J. Biol. Chem. 257, 734-741 (1982).
73. Hahne, G., and Hoffman, F. Dimethyl sulfoxide can initiate cell divisions of arrested callus protoplasts by promoting cortical microtubule assembly. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 5449-5453 (1984).
74. Максудов Г.Ю., Артюшкова В.А., Трояко Е.В. Оценка качества семени животных: Метод.рек. / Консервация генетических ресурсов. – Пущино, 1988. – 43 с.
75. Давтян А.Д. Искусственное осеменение в птицеводстве. – М.: Колос, 1984. – С. 46-50.
76. Карапетян Ю. А., Энчис В. Н. Физико-химические свойства электролитных неводных растворов. – М.: Химия, 1989. – 252 с.
77. Вайсбергер А., Проскауэр Э., Роддик Д., Тупс Э. Органические растворители. – М.: Химия, 1968. – 1450 с.
78. Искусственное осеменение птицы / А.Д.Курбатов, Л.Е.Нарубина, В.В.Богомолов и др. – М.:Агропромиздат, 1987. – С. 127 с.
79. Fiser P.S., Fairful R.W. The effect of glycerol-related osmotic changes on post-thaw motility and acrosomal integrity of ram spermatozoa // Cryobiology. – 1989. – V. 26. – P. 64-69.
Стоимость доставки работы, в гривнах:

(при оплате в другой валюте, пересчет по курсу центрального банка на день оплаты)		 300





Найти готовую работу


ЗАКАЗАТЬ

Обратная связь:


Связаться

Доставка любой диссертации из России и Украины

Вход для партнеров

Регистрация

Восстановить доступ

Материал для курсовых и дипломных работ


Ссылки:

Выполнение и продажа диссертаций, бесплатный каталог статей и авторефератов

Счетчики:

Besucherzahler
счетчик посещений

© 2006-2022. Все права защищены.
Выполнение уникальных качественных работ - от эссе и реферата до диссертации. Заказ готовых, сдававшихся ранее работ.